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檢驗科人員是核酸檢測工作的主力軍，我們不但要保證檢測結(jié)果的有效性，還時刻面臨著被感染的風(fēng)險。本文為大家講解《PCR實驗室新冠核酸檢測操作注意事項》，重點從新冠病毒生理特性、熒光PCR原理、PCR實驗室籌備規(guī)范、樣本檢測環(huán)節(jié)操作、實驗室數(shù)據(jù)分析、常見問題解析等幾個方面討論學(xué)習(xí)。
1、傳染源
目前所見傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者。無癥狀感染者也可能成為傳染源。
2、傳播途徑
經(jīng)呼吸道飛沫和密切接觸傳播是主要的傳播途徑。在相對封閉的環(huán)境中長時間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經(jīng)氣溶膠傳播的可能。由于在糞便及尿中可分離到新型冠狀病毒，應(yīng)注意糞便及尿?qū)Νh(huán)境污染造成氣溶膠或接觸傳播。
3、熒光PCR原理
4、常見問題解析
①新冠試劑出現(xiàn)翹尾，怎么處理？
答：如果是個別單一通道翹尾，不管是FAM還是VIC通道，首先按照要求復(fù)查，復(fù)查建議重新采樣，如果不方便重新采樣建議對原有樣本進(jìn)行重新提取核酸驗證，如果復(fù)查陰性判讀陰性，如果復(fù)查還是同一通道翹尾，就要對結(jié)果仔細(xì)審核，一是要排除實驗室污染，二是要對病人信息了解清楚，從臨床癥狀及接觸史排查，如果沒法確認(rèn)，建議必須重新采樣復(fù)查，如有必要可以采用另一家試劑來驗證。如果出現(xiàn)大量的弱陽性擴(kuò)增翹尾，首要原因是考慮實驗室污染，可以通過做環(huán)境樣本和陰性對照做驗證排除。
②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎，靈敏度哪個更高？是否會和其他冠狀病毒片段重疊？
答：N基因跟1ab都是特異的，不會跟其他呼吸道病原體交叉反應(yīng)。設(shè)計時候，兩個基因的序列不一樣，導(dǎo)致靈敏度不一樣，N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。
答：新冠病毒由于是RNA病毒，容易降解，另外檢測結(jié)果也和取樣，核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關(guān)，需要逐一分析，同時可以結(jié)合臨床癥狀判讀。
答：因為試劑采用的是內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)，內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)是用人源基因標(biāo)記，此基因存在于人的表皮細(xì)胞內(nèi)，操作過程中就可能會出現(xiàn)人源性的污染，另外環(huán)境污染也有可能導(dǎo)致內(nèi)標(biāo)增長，這也是前面提到的建議做環(huán)境樣本質(zhì)控。
答：如果新冠樣本內(nèi)標(biāo)不出，該樣本必須復(fù)查，可重新混勻該樣本提取核酸，如果重新提取該樣本內(nèi)標(biāo)還是不出，在排除提取問題的情況下，說明采樣不合格，要通知臨床重新采樣復(fù)查。
答：因為新冠試劑檢測的是人內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)，環(huán)境樣本一般不含有人源細(xì)胞，所以檢測不出內(nèi)標(biāo)；偶爾檢出內(nèi)標(biāo)，可能該環(huán)境樣本上有人源性細(xì)胞粘附，故而檢出內(nèi)標(biāo)。
重復(fù)進(jìn)行“變性 - 退火 - 延伸” 三個過程，模板DNA的量就會呈指數(shù)倍增加，理論上講經(jīng)過 n 個循環(huán)之后，模板量就會達(dá)到2的n次方。
③新冠檢測結(jié)果和臨床診斷不符合，怎么解讀？
④采用生理鹽水做陰性對照，內(nèi)標(biāo)也會增長，怎么解釋？
⑤新冠樣本內(nèi)標(biāo)不出如何處理？
⑥采集環(huán)境樣本檢測新冠狀病毒，為啥大部分樣本內(nèi)標(biāo)不出，偶爾個別樣本檢測出內(nèi)標(biāo)？
